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ELISA試劑盒檢測樣本不同結(jié)果是否一致
更新時(shí)間:2015-09-21   點(diǎn)擊次數(shù):1111次

ELISA試劑盒的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。

Elisa技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn),并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑(如SPA、凝集素等)的作用,發(fā)展成為許多新方法。此外,發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)椋?br>*,用于Elisa技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣,有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa,并建立相應(yīng)的Elisa方法。相反,自然界的化學(xué)元素是有限的,放射性同位素的種類更加有限。
第二,由于酶的多樣性,酶作用底物也有多種多樣,與此相對應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?br>
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。

有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。

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